近年来，脑损伤（TBI）增长率（21%）远超全球人口的增长率（6%），有“静息性流行病”之称，已成为全球医疗难题。

       昏迷是TBI的严重并发症之一。我国因TBI所致的长期昏迷患者以10万人/年的速度递增，给国家和患者家庭带来沉重的负担。目前临床上治疗TBI昏迷的方法有：药物治疗、物理治疗、高压氧治疗、中医针灸治疗等。电刺激治疗作为一种物理疗法已应用于临床昏迷患者促醒的治。

实验动物：普通级成年SD大鼠72只，体质量250~300g，适宜条件下饲养1周后开始实验。

实验分组及模型建立将72只大鼠分为4组，每组18只。

对照组：不做任何处理；

假刺激组：造模成功的TBI昏迷大鼠；

刺激组：造模成功的TBI大鼠给予MNES治疗；

拮抗剂组：造模成功的TBI大鼠侧脑室注射OX1R拮抗剂后给予MNES。使用经典“自由落体撞击法”构建TBI昏迷大鼠模型。

       乙醚吸入麻醉，取俯卧位，暴露颅顶，立体定位仪定位：中线左侧旁开2mm、冠状缝前1mm，用注射器针头十字标记此点为撞击点。待大鼠翻正反射恢复，依据大鼠体质量，将质量400g圆形铁柱从38~42cm高度沿垂直金属杆自由下落，撞击颅骨表面撞击点上的薄铝垫片，致颅骨凹陷性骨折，操作完毕，消毒并缝合皮肤。1h后采用双盲法完成意识状态等级评分。根据大鼠感觉及运动功能情况，将大鼠意识状态分6级，Ⅰ级：在笼内活动如常；Ⅱ级：在笼内活动减少；Ⅲ级：在笼内活动减少并运动失调；Ⅳ级：当背部放在笼的底部时能滚动（翻正反射存在）但不能站立；Ⅴ级：翻正反射消失但对疼痛刺激有肢体回缩反应；Ⅵ级：对任何刺激无反应。将Ⅴ、Ⅵ级评定为昏迷状态纳入实验。

       实验过程中大鼠意外死亡共8只：假刺激组5只，刺激组1只，拮抗剂组2只，在MNES治疗过程中无大鼠死亡，并重新挑选合格大鼠行相应的处理给予补充。

       刺激组大鼠在TBI昏迷造模成功后给予MNES治疗；拮抗剂组大鼠TBI造模成功后先行侧脑室注射OX1R，再给予MNES治疗；假刺激组连接MNES仪，但无电流输出。

        MNES治疗方法：于大鼠右前肢腕部内侧正中，距腕横纹约5mm处插入１根毫针，齿状接头夹住毫针，连接刺激仪。设置刺激参数：频率30Hz，脉宽0.5ms，电流1.0mA。总治疗时间为15min，共3个循环。刺激结束后1h，再次评估意识状态水平，实验完毕，返回笼中，给予充足的食物和水。

各组大鼠行为学改变

比较MNES治疗后1H再次进行意识状态评估，刺激组中13只大鼠出现翻正反射（Ⅲ级8只，Ⅳ级5只）；拮抗剂组中8只大鼠出现翻正反射（Ⅲ级4只，Ⅳ级4只）；假刺激组中4只出现翻正反射（Ⅳ级4只）。

各组大鼠免疫组织化学检测

α1R在PFC区神经元细胞膜和细胞质中均有表达（图１）。

 组间IHS比较：α1R水平从低到高依次为对照组（31.56）、假刺激组（31.78）、拮抗剂组（33.34）和刺激组（48.67），两两比较差异有统计学意义（P<0.05）。实验结束后6、12、24ｈ3个时间点的α1R的表达水平分别为34.25、35.08、40.17，呈依次递增趋势，但差异无统计学意义（P>0.05）。

        本实验通过观察大鼠行为学变化，发现刺激组昏迷大鼠18只中有13只清醒，拮抗剂组苏醒8只，假刺激组仅苏醒4只，表明MNES能提高意识状态水平，促进觉醒。此外，通过免疫组织化学检测发现PFC组织中α1R的表达水平呈对照组、假刺激组、拮抗剂组、刺激组依次递增趋势，差异有统计学意义（P<0.05），其中刺激组明显高于假刺激组，提示MNES可上调α1R表达水平。由此可说明MNES对TBI后昏迷大鼠具有促醒作用，其作用机制可能与增加PFC区α1R表达有关。假刺激组高于对照组，可能与TBI后应激性脑保护作用相关，以适应机体内外环境的变化。

        综上所述，MNES可以促进TBI后昏迷大鼠意识水平，并上调PFC中α1R表达水平。因此，该研究组推测MNES治疗TBI后意识水平的改善可能与增加PFC区α1R表达有关。上调PFC区α1R表达水平可能是MNES昏迷促醒的机制之一，且OXA参与调节此过程，但是具体的分子机制还有待进一步研究。

参考文献

陈琴,杜青,冯珍.MNES对脑损伤后昏迷大鼠PFC去甲肾上腺素α_1受体表达的影响[J].重庆医学,2017,46(18):2453-2455.